Extraccao de ADN a partir de tecido epitelial de lesma

O objetivo da pesquisa foi comparar tres protocolos: Extracao com SDS; Extracao com CTAB e 2-mercaptoetanol e Extracao com SDS e proteinase K, para determinar o metodo mais adequado para obter DNA de alto peso molecular e pureza em tecido epitelial de lesma: subfoco Arion e Deroceras reticulatum.

A concentracao e pureza de DNA foram estimadas espectrofotometricamente (absorvancia a 260 nm e relacao Abs260/Abs280 nm).

Foi utilizado um desenho completamente aleatorio com seis replicas.

Diferencas significativas (p<0,01) foram detectadas para quantidade, concentracao e pureza entre protocolos.

O protocolo (SDS e proteinase K) permitiu obter DNA com maior peso molecular (2 514,90±291,56) e pureza (1,97±0,02).

A qualidade do DNA de cada protocolo foi verificada por PCR-RAPD, observando-se pouca reprodutibilidade para o primer OPA-02 (protocolo SDS); enquanto nos outros metodos foram observados perfis de amplificacao de alta resolucao e bandas reprodutiveis.

Recomenda-se a utilizacao do protocolo SDS e da proteinase K, para obter DNA genomico de alto peso molecular, qualidade e pureza em lesmas.